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R&D Systems DuoSet® ELISA Kit 选购注意事项

【 日期:2013-1-31 15:30:04  |  浏览次数:5765 】

一、什么样的客户适合选用 DuoSet ELISA?

主要为客户筛选高通量的指标而设计的,适合熟悉ELISA研发的实验人员使用。没有ELISA经验,首次进行ELISA检测的客户不建议使用。

二、DuoSet ELISA Kit 里面一 共有多少块板子?

1DuoSet试剂盒包含的试剂可以满足大约1596微孔板的检测。

三、DuoSet ELISA Kit检测的样本类型是什么?

检测样本类型:细胞培养的上清液

熟悉ELISA研发的实验人员已成功将其推广到血清和血浆样本的使用。如果要决定试剂盒是否可用于组织匀浆(或其它未经检验)的样本,实验者最好先做一个掺入和回收预试验

简单来说,实验者将样本分为两份:一份中掺入一定量的试剂标准,然后做一稀释系列(一般稀释到1:16),再将掺入过的一份同未掺入的一份相比。采用以下的公式来计算回收率(%):测试值(pg /毫升)/ 期待值(pg /毫升)x 100% = % 回收率。一般来说,回收率在80-120%可认为是可接受的。但是,可接受范围应由每一实验室自行决定。这种方法可用于检定未被R&D Systems检定的任何样本。我们还有更加详细的掺入和回收的实验步骤,可向我们的技术服务部索取。我们也可进一步查阅文献看一看是否有其他试验人员用我们的产品做过不同的样本,或不同的属种。

四、DuoSet ELISA Kit包括哪些组分?

DuoSet 包括4种组分:

Ø         捕获抗体(Capture Antibody

Ø         检测抗体 (Detection Antibody)

Ø         标准品(Recombinant Standard

Ø         亲和素-辣根过氧化物酶 (Streptavidin-HRP)

五、DuoSet ELISA Kit需要另行购买的辅助试剂有哪些?

PBS: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.1 mM Na2HPO4, 1.5 mM KH2PO4, pH 7.2 - 7.4, 0.2 µm filtered
Wash Buffer: (Catalog # WA126), or equivalent
Reagent Diluent*
Blocking Buffer*
Substrate Solution: 1:1 mixture of Color Reagent A (H2O2) and Color Reagent B (Tetramethylbenzidine) (Catalog # DY999)
Stop Solution: 2 N H2SO4 (Catalog # DY994)
Microplates: R&D Systems (Catalog # DY990), or equivalent
Plate Sealers: ELISA Plate Sealers (Catalog # DY992), or equivalent
*For the Reagent Diluent and Blocking Buffer recommended for a specific DuoSet ELISA Development Kit, please see the product datasheet.

六、客户使用了DuoSet ELISA开发系统,但几乎就没有颜色产生。哪些步骤可能出了问题?

很多方面都会影响到颜色的产生。比如:

1) BSA的干扰。选择不含脂肪酸的ELISA级别的BSA很重要,可以降低球蛋白对实验的干扰。R&D Systems建议使用millipore BSA(目录#82-045)。

2) 非室温下的试剂在使用时会抑制信号;如果室温过低,信号也会被抑制。

3) 如果使用了未表明为高结合性ELISA”的微孔板,捕获抗体同微 孔板的结合就不牢固,从而导致测试的颜色产生过低。R&D Systems建议使用R&Dcat#DY990,25pcaks) 或者Costar EIA Plate cat#2592)。

4) 任何试剂,如果配制出错、储藏不当、或已过期,都将出现这一问题。R&D Systems建议:捕获抗体、检测抗体、标准品、亲和素-辣根过氧化物酶溶解之后必须在都有效期内使用完。

5读板时使用的波长同底物的波长不一致。

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