发布时间：2019-03-15

问: 抗体可以放-80度保存吗？

答: 不可以，对CST的大部分抗体而言，里面都有甘油，建议放在-20度，如果放在-80度抗体会被冻住，从而影响抗体的实验效果；对于一些偶联抗体建议放在4度保存。关于每个试剂的储存条件，请一定认真查看说明书。

问: Ref.是什么? 随抗体过来的说明书上的日期为什么和管子上的日期不同？

答: 抗体管子上的Ref.为抗体的生产日期，说明书的rev.为说明书的修订日期。

问 :实验步骤哪里找？

答: 登录官网 www.cst-c.com.cn, 点击您所需要的应用，再点击「实验步骤」就可以看到详细的试剂配制和实验步骤。

问 :IF-IC，IHC-P是什么意思？

答: IF-IC 为细胞的免疫荧光，IHC-P 为石蜡切片的免疫组化。

问: 抗体浓度怎么查?

答： 可以登录我们的官网 www.cst-c.com.cn，在最下方的“说明书和文档”的分析证书/COA中进行查询。

若不是您所需要的批号，可以根据抗体管子上的lot号码和货号咨询我们的技术支持tech@cst-c.com.cn或拨打我们的技术热线4006-GreatQ（473287）进行人工查询。

问: CST非偶联一抗为什么不建议分装？

答：CST非偶联一抗里含有50%的甘油，即使放在-20℃也不会冻住，因此反复从-20℃中取用抗体，对其稳定性影响不大；分装不当易造成抗体污染和损失，最终导致实验结果不稳定。所以CST的抗体不建议分装。

问：mAb是什么意思，产品名称里包含mAb的抗体和不包含mAb的抗体有什么区别？

答：mAb是monoclonal Antibody的意思，也就是单克隆抗体，如果产品名称上没有标注，CST产品命名上默认为兔源多抗，如Akt Antibody #9272是Akt兔源多克隆抗体。

问：应用上写了IHC、IF，为什么还有IHC-F、IHC-P、 IF-IC、 IF-F、IF-P?

答: IHC、IF 分别为免疫组化和免疫荧光，按照验证样本类型不同还可以细分为IHC-P(石蜡切片的免疫组化)、IHC-F（冰冻切片的免疫组化）和IF-IC（细胞样本的免疫荧光）、IF-F（冰冻切片的免疫荧光）、IF-P（石蜡切片的免疫荧光），建议根据具体的细分，选择符合自己实验的抗体。

问：靶标名字后面括号中的字是产品的货号吗？比如ROS1（D4D6）。

答: 此处括号中的D4D6不是产品货号，为克隆号，一般仅单克隆抗体才会标识此号码。CST产品的货号指的是“#”后面的四位或五位数字（如上图的货号是3287）。克隆号是单克隆抗体的克隆标识，类似实验室样品编号，没有具体的含义。

问: 为什么有些抗体的实际分子量和说明书中的分子量会有所偏差？

答: 原因很多：（1）蛋白的翻译后修饰经常会引起蛋白在SDS-PAGE 凝胶中的表观分子量不同于根据氨基酸序列换算出的预测分子量。这些修饰包括磷酸化，甲基化，乙酰化，泛素化以及SUMO化等等。样品中某一蛋白同时存在不同的修饰时，经常会造成膜上检测出多个条带。（2）翻译后剪切也是一方面的原因。（3）各种mRNA剪切体的不同表达模式也可以改变分子量，不同的样本模型也可能是一方面的原因。（4）SDS-PAGE 凝胶的成分和跑胶的条件以及预染marker自身所带电荷也都是一些重要的影响因子。（5）对于部分蛋白存在的特殊结构，如：p53蛋白表观分子量是53kDa（这也是该蛋白名字的由来），但是根据氨基酸序列计算得到的分子量却是43kDa。

问 :同一个产品那么多种，到底哪个大家用得多呢?

答：打开官网www.cst-c.com.cn, 进入每个产品的详细页面后，下拉至最下方，看到有一个栏目是 “Product Citations” ，可以知道这个产品的引用次数，点击”View All Citations” 之后，就可以看到所有的引用文献及原文链接。

问：产品的货号和批号分别在哪里？

答：货号是#后面的四位或五位数字，以IL-17A (D1X7L) Rabbit mAb (Mouse Specific) #13838为例，13838为这个产品的货号，而批号(即lot号码)只出现在抗体管子的外标签上，说明书上是看不到批号的。

问：XP®是什么意思？

答 :XP®（exceptional performance）单克隆抗体是经由CST公司研发的XMT®( exceptional Monoclonal Technology)单克隆抗体技术生产而来。这项革命性的专利技术能够得到更多分泌抗体的B细胞，而这些细胞不是传统单克隆技术所能够得到的，最终能促进更全面地筛选和制备XP®单克隆抗体。因此，对于目的靶点，建议您优选带有XP®标签的抗体。

问: pan是什么意思？

答:如果没有特别指明，pan 一般是代表总蛋白的意思，以Akt (pan) (11E7) Rabbit mAb #4685为例，在“特异性/敏感性”这栏可以看到是检测Akt的总蛋白水平。

问: 做IF时，一抗用什么稀释液？

答: 一般建议用1X PBS / 1% BSA / 0.3% Triton X-100来做一抗的稀释缓冲液，配置方法如下：要制备 10 ml，添加 30 µl Triton™ X-100 至 10 ml 1X PBS 中，充分混合后，添加 0.1 g BSA (#9998)后，再次混合。

问 :我在网上发现我所需要的产品已停产，有替代品吗？

答： 如果您输入了您所需产品的英文名称之后，发现该产品已停产，在下方会出来一个推荐产品，如果没有出现这一栏，很抱歉，您可能需要等待一段时间到新产品出来。有时候幸运的话CST中国会有库存，请实时咨询下CST中国授权代理商。

问：为什么有些种属加了个括号？

答：有些种属会加上括号，这表示根据序列同源比对，是100%符合的，但是我们并没有做过关于这些种属的实验，您可以去尝试，但是无法保证实验质量。

问：WB封闭用牛奶好还是BSA好？二抗稀释液用什么？

答: 封闭和二抗的稀释液建议都用含5%脱脂奶粉的TBST混合液 ，均在室温下孵育1小时。

问: 抗体识别序列大概在哪里？

答:登陆www.cst-c.com.cn，以LC3B (D11) XP® Rabbit mAb #3868为例，在产品页面的“来源/纯化”这栏就可以看到大概在哪个氨基酸附近等信息，若没有相关信息，可以发邮件至tech@cst-c.com.cn，请求CST咨询技术支持来查询。

问 : ChIP的实验步骤哪里找？

答 :登陆www.cst-c.com.cn，点击“正在寻找学术资源”，就可以进入到“CST学术资源下载中心”进行下载。

还可以直接在微信输入关键词“ChIP”，就会跳出您想要的相关资料，为了更好的解析ChIP实验，CST制作了ChIP秒懂视频，从理论到操作一次解决，是小白学习的最佳选择。

问: 为什么我用了#5633，即p38 MAPK的抑制剂 SB203580 ,磷酸化的p38 MAPK的趋势却没有下降？

答：SB203580能够结合到p38 MAPK与ATP结合的位置从而抑制p38 MAPK的催化活性，但不会通过上游激酶抑制p38 MAPK的磷酸化，也就是说，这个抑制剂不能抑制p38本身的磷酸化，而是抑制p38的激酶活性的，只会影响p38下游蛋白的磷酸化。

问：如果我要取不同的细胞组分进行检测，他们相应的loading control怎么找？

答：可以www.cellsignal.com/catalog/loading-controls.html 中找到答案。另外CST提供内参组合，如Cell Fractionation Antibody Sampler Kit #11843 就包含几种不同的内参：Histone H3 (D1H2) XP® Rabbit mAb #4499 可以作为核内参；AIF (D39D2) XP® Rabbit mAb #5318 可以作为线粒体内参；Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb #5741 是细胞骨架的标志物；MEK1/2 (D1A5) Rabbit mAb #8727 可以作为细胞质内参。

有关内参的详情，推荐阅读内参蛋白，你选对了吗？

问： 样本保存不当会降解，那么我该如何储存SDS 裂解的磷酸化蛋白样本呢？

答:活化（如磷酸化）的蛋白样本的降解变化很大，如果你短期内使用样本做完实验( 少于3个月)，那么含SDS细胞裂解液的样本可以储存在-20℃，如果长期储存，应将样本保存于-80℃。另外，活化的蛋白样本的降解率还由每种蛋白的性质和样本里究竟含有多少活化的蛋白所决定。

问:用CST的裂解液和loading buffer的时候，是不是需要加入特殊的抑制剂？

答 :CST的裂解液中已经加入了很多的抑制剂。RIPA Buffer (10X) #9806 和 Cell Lysis Buffer (10X) #9803 都只需要再额外加入PMSF #8553。

如果你的裂解液是自制的，那需要加入 PMSF #8553, Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5870, Protease Inhibitor Cocktail (100X) #5871, 和/或 Protease/Phosphatase Inhibitor Cocktail (100X) #5872。

CST的Loading buffers （Blue Loading Buffer Pack #7722，Red Loading Buffer Pack#7723）通常不需要加入磷酸酶和蛋白酶抑制剂，因为里面的SDS足够防止蛋白降解。

问: 我们实验室做WB实验时，显带用的荧光系统，但发现信号比化学显影的条带弱一些，有什么方法尽量使信号强一些呢？

答: 做荧光WB 有2个需要特别注意的地方：（1）封闭的时候不要加Tween-20 （2）检测之前膜要保持完全干燥的状态。但是，CST目前没有验证过抗体的荧光WB应用，所以无法保证您的实验质量。

若您做荧光WB，建议在DyLight 680 或 DyLight 800 的波长下检测，避免多通道的情况。

（来自CST博士互助平台）

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