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Thermo Scientific Phusion DNA 聚合酶——强劲、准确、快速PCR扩增的聚合酶

发布时间：2023-02-27

Thermo Scientifific™ Phusion™ 高保真DNA聚合酶经设计用于强劲的DNA片段扩增，适用于多种要求高性能的实验应用。在 Phusion 高保真 DNA 聚合酶中，一个 DNA 结合域融合到类热球菌（Pyrococcus）具有校对功能的聚合酶上。借助这种独特的融合技术，Phusion DNA 聚合酶以一般聚合酶无法企及的准确率和速度合成PCR 产物，即使是扩增复杂的模板。

Thermo Scientific Phusion DNA 聚合酶特点概述

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Phusion Plus 高保真DNA聚合酶

特点：

1、高序列准确度 — >100×Taq 聚合酶高保真度

2、设置方便 — 对不同引物均使用60°C通用退火温度，无需计算Tm

3、更高的特异性和工作台稳定性 — 通过热启动修饰减少非特异性扩增和引物降解，配制好的反应体系可在室温下稳定24小时，适用于自动化和高通量应用

4、强劲扩增 — 高效扩增高GC含量序列和包含DNA抑制剂的模板；快速延伸速度15–30 sec/kb

5、更少的加样步骤 — 提供包含或不包含上样染料的预混液形式

产品列表：

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Phusion High-Fidelity 高保真酶

特点：

1.高保真度

在许多分子生物学实验中，包括克隆、定点突变和 DNA 翻译，保证 PCR 扩增中 DNA 序列的精确性尤为重要。一个错误整合的核苷酸可能改变各自的密码子，在翻译过程中导致错误氨基酸的插入。如此相应的也会影响蛋白质的折叠和功能特性。此外，单个核苷酸的缺失也能破坏正确的阅读框。

Phusion DNA聚合酶在现有的热稳定酶中具有最高的保真性。Phusion DNA聚合酶的错配率已使用 454 测序5和 Illumina 测序方法3，验证了Phusion DNA 聚合酶的低错配率（表1）

2.成功扩增长达20 kb的目的片段

Phusion DNA 聚合酶是长片段 PCR 扩增的理想选择。该酶的持续合成能力使其可以扩增不同大小的模板。即使扩增20 kb的片段也具有很高的产量、较短的循环时间和高保真度。

图1.获得高产量的长片段 PCR 产物。使用Phusion DNA 聚合酶和其它供应商的校正DNA 聚合酶分别扩增 20kb 的λDNA 片段和7.5 kb的人类基因组 DNA 片段。

3.使用少量的酶也能进行有效的扩增

Phusion DNA 聚合酶的独特结构使其具有极高的效率。与普通聚合酶相比，进行任意 PCR 扩增所需的酶单位数明显减少。快速和高效使得在最短的时间里可得到很高的产量。除此之外，Phusion 聚合酶功能强劲，最大程度地减少了优化反应的时间。

图2.所用酶量更少，效率更高。用三种不同 DNA聚合酶扩增人类ß球蛋白基因中的 3.8 kb 的片段。使用 Phusion DNA 聚合酶，采用合并的1分钟退火延伸步骤即可扩增 3.8 kb的基因组片段，从而使其比所测试的其它聚合酶更加快速。一个单位的Phusion DNA 聚合酶比 2.5 或5 个单位的Pfu DNA 聚合酶具有更高的产量。

产品列表：

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Phusion HS II High-Fidelity 热启动高保真酶

特点：

1.高特异性的热启动 PCR

Phusion Hot Start II 高保真 DNA 聚合酶是具有高准确性的热启动 DNA 聚合酶。它将 Phusion DNA 聚合酶和一个可逆结合、特异性的 AffifibodyTM 配体结合。Affifibody 配体在室温下抑制DNA聚合酶的活性，因此能阻止非特异性产物的扩增。另外，可在室温条件下配制反应体系使其可用于高通量的机械化操作。Affifibody 配体也能抑制聚合酶的 3´-5´ 核酸外切酶活性，避免在反应体系配制过程中引物和模板 DNA 的降解。在聚合温度下，该配体被释放，使聚合酶具有完全活性。在 PCR 过程中，Phusion Hot Start II DNA 聚合酶在高温下可瞬时激活，无需单独的激活步骤。

2.对高 GC 含量的模板也能进行强劲的扩增

经优化的缓冲体系与该酶较强的持续合成能力协同作用，使得 Phusion DNA 聚合酶可扩增很宽范围的不同序列 DNA 模板。能有效的扩增难以扩增的片段，如 85% GC 含量的模板，展示了该酶高效的高保真扩增能力。

图3. 扩增不同序列组成的DNA片段。扩增四种不同 GC 含量的DNA片段。Phusion 绿色高保真 DNA 聚合酶能高产量地扩增出所有四种产物。相比之下，竞争对手的高保真聚合酶难以有效扩增出 GC 含量丰富的产物。

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3.Phusion Flash High-Fidelity 快速高保真

特点：

1、高保真快速 PCR

相比于其它聚合酶，Phusion DNA 聚合酶每次结合会整合更多的核苷酸。其高持续合成能力使得延伸时间极短，从而减少整个实验流程的时间。使用 Thermo Scientifific Phusion Flash High-Fidelity PCR 预混液，一种专为快速 PCR 开发的产品，可在最短的时间完成实验流程。

图 4. 使用 Thermo Scientifific Phusion Flash 预混液，速度快，产量高。使用三种不同的聚合酶，以不同的延伸时间（10-60s），在Thermo Scientifific™Piko™ 热循环仪中扩增 1.5 kb 的人类cathepsin K 基因。只有 Phusion Flash预混液能在 10 和 20 s这样短的延伸时间里扩增出 1.5kb 的基因条带。相比于所测试的其它酶，其能扩增得到更高产量的特异性产物。

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4.Phusion其他产品

Phusion U DNA聚合酶和预混液产品列表：

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多重PCR预混液产品列表：

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其它基于Phusion聚合酶的产品产品列表：

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